2017年5月26日

MSP甲基化检测

原理:

甲基化特异性的PCR是一种灵敏度高且操作相对简单的甲基化研究方法。重亚硫酸盐处理DNA后,基因组DNA发生的由甲基化状态决定的序列改变。随后进行引物特异性的PCR。该方法引物设计是关键。MSP中设计两对引物,即一对结合处理后的甲基化DNA链(引物对M),另一对结合处理后的非甲基化DNA链(引物对U)。检测MSP扩增产物,如果用引物M能扩增出片段,则说明检测位点存在甲基化;若用引物U扩增出片段,则说明被检测的位点不存在甲基化。

该方法优点是:检测灵敏度高,样品消耗少,仅需1μg的基因组DNA,可用于石蜡包埋样本;快速、简单,省时。

MSP流程示意图

用亚硫酸盐处理后DNA分子发生了由甲基化状态决定的序列改变。用甲基化特异性的引物(primer M)和非甲基化特异性的引物(primer U)进行扩增。只有结合完全的甲基化或非甲基化特异性引物的片段才能得到扩增。

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