2017年5月26日

组织

样品量与制备流程:

1、组织离开活体后请尽快进行操作(不超过30分钟),准备 20 mg-100mg 的组织即可,组织块过大易拉长操作与保存液渗透时间,可能导致组织块中的 RNA 降解 (degradation);
2、液态氮保存法:准备 20-100 mg 的组织块,大小约 0.5 cm x 0.5 cm x 0.5 cm,先置于液态氮中快速冷冻,再将样品放入专门存放液态氮的冷冻小管中 (请使用抗冻冷冻小管),保存于液态氮筒中;
3、Trizol reagent (Invitrogen # 15596-018) 保存法:Trizol试剂可抑制RNA酶活性,破坏细胞膜结构以裂解细胞释放出RNA。取新鲜组织(注:生物体死亡后1分钟内取材料并保存好),组织块以PBS或生理盐水清洗干净,每50-100 mg组织加1 ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品,操作最好在冰上进行。匀浆的裂解液可于- 80℃长期保存;
4、 RNAlater保存法:请参照RNAlater 说明书进行操作,注意 使用 RNAlater 时,加入组织大小5-10倍体积的 RNAlater 溶液,以 RNase free 的剪刀将组织剪成小块使 RNAlater 溶液能够完全浸透,先置于4度冰箱过夜或至少3小时,再转移 -20 或 -80 度保存,请勿直接置冰箱冻存。

寄送注意事项:

1、自液氮或 -80°C (Trizol 或 RNAlater 保存) 取出样品,确认各个离心管/ EP 管或冷冻管盖密合度佳,且以parafilm 封口膜缠绕包装盖口;
2、以小盒、封口袋或 50 mL 离心管包装样品,置于塑料袋中。样品说明单请以封口袋或塑料带保护以免湿气毁损文件。将样品与文件置入盒内,以密闭性较佳或厚度较厚的泡沫盒,加入干冰搭配冰袋运送 (一天所需的干冰量约 3公斤)。以宽胶带缠绕密封泡沫盒即可寄出;
3、RNAlater裂解样本的运送以能保证样品维持在4度以下为原则,液氮或Trizol 保存的样本需要全程以干冰运送。

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Patrick Onwuasor Jersey