技术手册

通过正确的制备和实验流程,倾力为客户提供优质和高效的服务,提升客户的技术研发质量,降低研发成本,缩短研发周期。

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    高通量测序样品制备要求

    代表性原则:取样的代表性直接关系到实验结果的最后解释和后续分析的的准确性和科学性。实验样品取样,包括样品类型,取样的操作流程,实验分组的设定。基本要求实验处理组和对照组的样品在取材方式和处理条件等方面尽可能保持一致,否则可能会影响实验结果的重复性和可信度。[更多内容]

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    RNA

    制备流程:

    1、总 RNA 或 small RNA溶于RNase-free H2O (建议) 或100% 酒精,保存于 -80°C,直至运送;
    2、以干冰低温寄送。请确认使用的1.5mL 微量离心管(EP管)管盖密合度佳,且以parafilm封口膜缠绕包装盖口;
    3、以小盒、封口袋或 50 mL 离心管包装样品,置于塑料袋中。样品说明单请以封口袋或塑料带保护以免湿气毁损文件。将样品与文件置入盒内,以密闭性较佳或厚度较厚的泡沫盒,加入干冰搭配冰袋运送 (一天所需的干冰量约 3公斤)。以宽胶带缠绕密封泡沫盒即可寄出。

    送样量(华联芯片):

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    石蜡标本

    样品量与制备流程:

    1、蜡块组织面积需 >= 25mm2,一般手术获得样品皆可达此要求;
    2、切片机设定厚度10 μM,切5-10片 (总厚度为50-100 μM),直接置入1.5mL离心管,样品可暂存4°C,一周内室温寄送完成;
    3、若需要同时抽取总 RNA以及基因组 DNA,组织面积则尽量 > 100mm2,厚度需求与第二点相同;
    4、建议收样设计/细节:
     切片第一片, 请制作成病理玻片保存,以便确认组织大小,将来可作为组织来源的相关病理确认;
     蜡块样品年限建议小于3年内之蜡块;
    5、若要进行mRNA芯片检测服务,RNA完整度要求Agilent Bioanalyzer可以侦测到28S的讯号。

    寄送注意事项:

    1、FFPE 石蜡包埋切片应存放于4°C,一周内完成室温寄送;
    2、请确认各个离心管/ EP 管或冷冻管盖密合度佳,且以parafilm 封口膜缠绕包装盖口;
    3、以小盒或 50 mL 离心管将样品分别包装,再集中于塑料袋中。将样品与送样单置入盒内,加入冰袋以泡沫盒4度运送,或在一周内常温运送。

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    血清血浆

    样品量与制备流程:

    1、血清/血浆:EDTA采血管 (紫头) 采2-3 mL血液后,倒转混和均匀后,须将全血以离心进行血清/血浆与红血球分离 (建议1100-1300g,离心10分钟),分离后的血清/血浆可存放于 -20°C /-80°C数周至数月
    2、样品有特殊需求,请联络卓立生物技术支持。

    寄送注意事项:

    1、自-20°C /-80°C 取出分离后的血清/血浆样品,确认各个离心管/ EP 管或冷冻管盖密合度佳,且以parafilm 封口膜缠绕包装盖口 ;
    2、以小盒、封口袋或 50 mL 离心管包装样品,置于塑料袋中。样品说明单请以封口袋或塑料带保护以免湿气毁损文件。将样品与文件置入盒内,以密闭性较佳或厚度较厚的泡沫盒,加入干冰搭配冰袋运送 (一天所需的干冰量约 3公斤)。以宽胶带缠绕密封泡沫盒即可寄出;
    3、血清/血浆样本的运送以能保证样品维持在4度以下为原则;
    4、全血样本白细胞分离或白细胞RNA抽提请参考文件—全血样本制备。

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    组织

    样品量与制备流程:

    1、组织离开活体后请尽快进行操作(不超过30分钟),准备 20 mg-100mg 的组织即可,组织块过大易拉长操作与保存液渗透时间,可能导致组织块中的 RNA 降解 (degradation);
    2、液态氮保存法:准备 20-100 mg 的组织块,大小约 0.5 cm x 0.5 cm x 0.5 cm,先置于液态氮中快速冷冻,再将样品放入专门存放液态氮的冷冻小管中 (请使用抗冻冷冻小管),保存于液态氮筒中;
    3、Trizol reagent (Invitrogen # 15596-018) 保存法:Trizol试剂可抑制RNA酶活性,破坏细胞膜结构以裂解细胞释放出RNA。取新鲜组织(注:生物体死亡后1分钟内取材料并保存好),组织块以PBS或生理盐水清洗干净,每50-100 mg组织加1 ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品,操作最好在冰上进行。匀浆的裂解液可于- 80℃长期保存;
    4、 RNAlater保存法:请参照RNAlater 说明书进行操作,注意 使用 RNAlater 时,加入组织大小5-10倍体积的 RNAlater 溶液,以 RNase free 的剪刀将组织剪成小块使 RNAlater 溶液能够完全浸透,先置于4度冰箱过夜或至少3小时,再转移 -20 或 -80 度保存,请勿直接置冰箱冻存。

    寄送注意事项:

    1、自液氮或 -80°C (Trizol 或 RNAlater 保存) 取出样品,确认各个离心管/ EP 管或冷冻管盖密合度佳,且以parafilm 封口膜缠绕包装盖口;
    2、以小盒、封口袋或 50 mL 离心管包装样品,置于塑料袋中。样品说明单请以封口袋或塑料带保护以免湿气毁损文件。将样品与文件置入盒内,以密闭性较佳或厚度较厚的泡沫盒,加入干冰搭配冰袋运送 (一天所需的干冰量约 3公斤)。以宽胶带缠绕密封泡沫盒即可寄出;
    3、RNAlater裂解样本的运送以能保证样品维持在4度以下为原则,液氮或Trizol 保存的样本需要全程以干冰运送。

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    细胞

    样品量与制备流程:

    1、贴壁细胞:准备5×106个细胞,倒除培养液后用PBS冲洗,将贴壁不牢的细胞重洗下来,然后直接加入 Trizol reagent (Invitrogen # 15596-018, 10cm petri dish 约加入 1 ml Trizol reagent),用枪头抽吸数次,将细胞溶解后保存于 -80°C(或者将细胞以Trypsin处理后,离心去除上清液再加入1ml Trizol,并震荡将细胞溶解后保存于 -80°C);
    2、悬浮细胞:约 5×106 个细胞经离心收集后,去除上清液,加入 1ml Trizol reagent,震荡将细胞溶解后保存于 -80°C。

    寄送注意事项:

    1、自-80°C 取出已加入Trizol 均质裂解的细胞样品,确认各个离心管/ EP 管或冷冻管盖密合度佳,且以parafilm 封口膜缠绕包装盖口;
    2、以小盒、封口袋或 50 mL 离心管包装样品,置于塑料袋中。样品说明单请以封口袋或塑料带保护以免湿气损坏文件。将样品与文件置入盒内,以密闭性较佳或厚度较厚的泡沫盒,加入干冰搭配冰袋运送 (一天所需的干冰量约 3公斤)。以宽胶带缠绕密封泡沫盒即可寄出。

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Patrick Onwuasor Jersey